猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法的建立及初步应用

摘要：

为建立一种能够准确、快速地鉴别猪肠病毒G型的诊断方法,本研究参考猪肠病毒G型的3D基因序列设计1对特异性引物,扩增片段预计大小约为104 bp,将3D基因片段克隆到pMD18-T载体上的阳性重组质粒作为标准品,建立猪肠病毒G型的实时定量PCR检测方法,并应用到临床样品的检测.研究结果显示,该方法设计的引物具有高度的特异性;标准曲线的Cq值与质粒标准品模板在2.92×108 copies/μL～2.92×102 copies/μL范围内,呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-4.023;组内与组间重复性试验显示变异系数很小,在0.26％～1.57％之间.该方法的最低检测限量可达2.92×10 copies/μL.使用本方法对2017-2019年广西部分地区的猪场临床腹泻粪便样品进行检测,猪肠病毒G型阳性检出率为18.42％,说明广西部分地区的猪场存在猪肠病毒G型的感染.本研究成功建立了猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法,可用于猪肠病毒G型感染的临床检测.

关键词：猪肠病毒G型、实时定量PCR、检测方法

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分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：广西创新驱动发展专项资金项目;广西自然科学基金;贵港市科学研究;技术开发计划项目

在线出版日期：2020-06-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：563-569