奶牛乳房炎四种致病菌PCR核酸免疫层析试纸条快速检测方法的建立及应用

摘要：

为了开发检测导致奶牛乳房炎的无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和停乳链球菌这四种重要致病菌的PCR核酸免疫层析试纸条方法,本研究采用柠檬酸还原法制备10 nm的胶体金溶液,选用优化的10 μL 1 mol/L碳酸钾溶液调节pH和5 μL异硫氰酸荧光素抗体偶联金颗粒,并使用优化的封闭液(10％BSA、0.25 ％PEG2000、0.05％吐温-20、0.05％ Triton-X100)进行封闭,将地高辛抗体和山羊抗鼠二抗分别喷涂在检测线和质控线上,烘干并组装成试纸条,进行细菌的纯培养物和鲜牛奶加样检测.结果 显示,所制备的PCR核酸免疫层析试纸条和凝胶电泳均具有较好的特异性,最低检测限要比凝胶电泳高10倍,在模拟污染牛奶样品测试中,试纸条仍然具有很好的特异性且灵敏度比凝胶电泳的高.上述结果表明,本研究建立的PCR核酸免疫层析试纸条检测方法具有良好的临床应用潜力.

关键词：奶牛乳房炎、PCR、胶体金、检测

所属期刊栏目：50

分类号：S857.26(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2018YFC1603600

在线出版日期：2020-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：283-293