口疮病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

摘要：

为建立检测口疮病毒(orf virus,ORFV)抗体的间接ELISA方法,原核表达口疮病毒B2L蛋白与6×组氨酸标签的重组蛋白;对纯化复性后的重组B2L蛋白进行Western-blot鉴定;用复性后的重组B2L蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立检测ORFV抗体的间接ELISA,并进行特异性、灵敏度和重复性评价,最后应用所建立的间接ELISA对来自四川部分地区的384份山羊血清样品进行检测.结果 显示,成功原核表达出42 ku的重组ORFV B2L蛋白.Western-blot结果表明,重组蛋白具有良好的抗原反应性.间接ELISA最佳反应条件为:包被抗原质量浓度为5 μg/mL,1∶100稀释血清作用2h,酶标二抗以1∶2 000稀释作用30 min,TMB显色时间为15 min.在该优化条件下,D450≥0.31为阳性.该方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性.临床样品的间接ELISA检测结果显示,总阳性率为66.67％(256/384),其中未接种过疫苗的羊只抗体阳性率为34.81％ (55/158).上述结果表明,建立的间接ELISA可用于ORFV抗体的检测,四川部分地区山羊场羊只感染野毒的概率较大,疫苗免疫效果不佳.

关键词：山羊、口疮病毒、重组B2L蛋白、原核表达、间接ELISA

所属期刊栏目：50

分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省科技计划项目2017NFP0046;西南民族大学研究生创新课题项目CX2018SZ23

在线出版日期：2020-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：168-175