牛传染性鼻气管炎病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

为了检测牛传染性鼻气管炎病毒,本研究建立了牛传染性鼻气管炎病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法.通过设计特异性引物扩增病毒基因,将扩增的目的片段(119 bp)连接到pMD19-T载体中,构建重组质粒.将重组质粒作为阳性标准品,用于SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立.结果 显示,特异性引物扩增的目的片段约为119 bp,符合预期的大小,经测序鉴定所扩增的目的片段正确.敏感性结果显示,用该方法检测阳性质粒标准品的最低限度为3.04×101 copies/μL,是Nano-PCR的10倍.将牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒3型与牛传染性鼻气管炎病毒进行特异性检测.结果 显示,只有牛传染性鼻气管炎病毒被检测到,其他病毒均未有特异性的扩增曲线,表明该方法的特异性良好.批内和批间重复变异系数均小于1％,显示该方法具有良好的重复性.用建立的方法对20份疑似IBRV的临床样品进行检测,并与Nano-PCR检测方法进行对比,结果显示本方法的阳性样品率高于Nano-PCR检测方法.本研究建立的牛传染性鼻气管炎病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,可用于牛传染性鼻气管炎病毒的检测.

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒、实时荧光定量PCR、检测方法

所属期刊栏目：50

分类号：S852.659.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;国家重点研发计划

在线出版日期：2020-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：135-140