H5亚型禽流感病毒样颗粒的制备及其免疫原性的初步研究

摘要：

本研究采用RT-PCR方法扩增2.3.4.4分支H5亚型高致病性禽流感病毒HA、NA和M1基因,亚克隆至穿梭载体pFastBacl,然后转化至DH10Bac感受态细胞,筛选重组杆粒.将阳性重组杆粒共转染至sf9昆虫细胞,构建病毒样颗粒(VLPs),通过血凝和血凝抑制试验、透射电镜、Western-blot等方法鉴定.利用蔗糖密度梯度超速离心浓缩纯化VLPs,选择不同剂量VLPs免疫6周龄SPF鸡,评价其免疫原性.结果 显示,成功构建重组杆粒,转染的sf9细胞出现皱缩、变形、融合、囊泡化等特征性病变;在细胞盲传3代后,含有VLPs的细胞上清液的血凝效价可达1∶27;Western-blot证实3个目的蛋白均成功表达;透射电镜观察结果表明,VLPs与天然禽流感病毒颗粒具有相似的形态特征;动物试验结果表明,二免后2周,血清抗体效价最高可达到1∶210,抗体亚型主要为IgG1.本研究首次成功构建了2.3.4.4分支H5亚型禽流感VLPs,为开发新型、安全、高效的H5亚型禽流感疫苗奠定了基础.

关键词：2.3.4.4分支、H5亚型禽流感、病毒样颗粒、杆状病毒表达系统

所属期刊栏目：49

分类号：S852659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2016YFD0501609

在线出版日期：2019-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：961-968