口蹄疫病毒VP2蛋白特异性单克隆工程抗体的表达与活性鉴定

摘要：

为了在牛上应用单个B细胞抗体技术制备口蹄疫病毒(FMDV)特异性单克隆抗体,本研究利用生物素标记O型FMDV 146S抗原,从免疫牛外周血单个核细胞(PBMCs)中分选单个抗原特异性B细胞,通过单个B细胞抗体基因测定,获得IgG抗体重链与轻链可变区编码序列,将可变区基因插入含有牛IgG抗体恒定区的pcDNA3.4载体中,构建完整IgG抗体的表达质粒.将表达质粒转染中国仓鼠卵巢悬浮细胞(CHO-S)进行抗体表达与纯化.经病毒中和试验(VNT)、间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELBA)、Western-blot验证抗体的生物活性.结果 显示,获得了4株FMDV特异性单克隆工程抗体,其中2株(A35、B57)可以中和O型FMDV;2株(A7、E32)IFA检测为阳性,其中E32可特异性结合O型和A型FMDV两种抗原,但没有病毒中和活性;ELISA结果显示,E32具有较好的亲合力;Western-blot结果显示,E32可特异性结合衣壳蛋白VP2,说明在衣壳蛋白VP2存在型间保守的抗原位点,为通用型FMDV抗原检测方法的研究提供了材料.

关键词：口蹄疫病毒、单个B细胞抗体技术、单克隆工程抗体、衣壳蛋白VP2

所属期刊栏目：49

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划项目2017YFD0501104,2017YFD0500902

在线出版日期：2019-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：939-946