产气荚膜梭菌β毒素和ε毒素以及腐败梭菌α毒素三联基因工程灭活疫苗的制备与免疫效力评价

摘要：

为了获得高表达量的重组C型产气荚膜梭菌β毒素,鉴定其致死性和反应原性,并评价其与D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素共表达产物联合制成三联基因工程灭活疫苗的免疫保护效力.设计合不同酶切位点的2对引物,PCR扩增C型产气荚膜梭菌β毒素基因cpb1和cpb2,将二者克隆至pRSF-Duet-1质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),自诱导培养基诱导2段基因共表达.用SDS-pAGE和West-ern-blot以及小鼠毒性试验、抗毒素血清和中和试验对表达产物进行鉴定.将诱导收获的大肠杆菌以及D型产气荚膜梭菌ε毒素和腐败梭菌α毒素的共表达产物1∶2配比灭活制成三联灭活铝佐剂疫苗,以每只1 mL剂量皮下免疫家兔2次后,测定血清中和抗体效价,用1 MLD的C、D型产气荚膜梭菌毒素和腐败梭菌毒素分别攻击.结果 显示,所构建的重组大肠杆菌BL21(pRSFDuet-cpb1-cpb2)能够表达重组β毒素,产物能够与C型产气荚膜梭菌抗毒素血清反应,且具有小鼠致死毒性,抗毒素血清可以将其毒性中和;制成联合疫苗免疫家兔,免疫血清对C型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为8 MLD/0.1 mL,对D型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价为45 MLD/0.1 mL,对腐败梭菌毒素的中和抗体效价为1.5 MLD/0.1 mL;用3种毒素攻击免疫组家兔均全部保护,对照组全部死亡,达到《中华人民共和国兽药典三部(2015版)》效力检验标准.本研究为羊猝狙、肠毒血症和快疫三联疫苗的研制提供了试验基础.

关键词：产气荚膜梭菌、腐败梭菌、β毒素、ε毒素、α毒素、共表达、疫苗

所属期刊栏目：49

分类号：S852.615(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划项目2017YFD0500905

在线出版日期：2019-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：918-923