猪圆环病毒3型Cap蛋白的表达纯化及单克隆抗体的制备

摘要：

猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3)是新近被发现的病原,与之相关的疾病包括母猪繁殖障碍、猪皮炎与肾病综合征、猪呼吸道疾病综合征、仔猪先天性震颤等.本研究采用PCR方法从PCV3/CN/GDLC1/2016株中扩增出衣壳蛋白(Cap)基因,对Cap基因进行序列分析并预测其二级结构,将去除信号肽序列的PCV3 Cap基因片段克隆到表达载体pET-32a(+)中,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,经镍柱纯化表达蛋白,通过免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体(MAb).结果表明,重组PCV3 Cap蛋白为包涵体,大小约38 ku,最佳诱导时间为4h.通过镍柱成功纯化PCV3 Cap蛋白,筛选获得A8F、C6D、C7E、C6E、C9C、C9E、B7D和C11C等8株能稳定分泌抗PCV3 Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株.ELISA结果表明,A8F、C6D、C9E和B7DMAb均属于IgG2b亚类,C7E、C6E和C9C均属于IgM亚类,C11C属于IgG1亚类;A8F、B7D和C11C MAb效价均大于1∶64 000,C9E效价为1∶32 000,C6E效价为1∶8 000,C6D、C7E和C9C效价均为1∶1 000.经Western-blot分析,重组PCV3 Cap蛋白能与抗His标签抗体和抗PCV3 Cap蛋白MAb进行特异性免疫印迹反应,证实表达蛋白具有良好的反应原性.本研究为今后PCV3的防控提供了技术支持和实验基础,具有重要的生产实践意义.

关键词：猪圆环病毒3型、Cap蛋白、原核表达、纯化、单克隆抗体

所属期刊栏目：49

分类号：S852.659.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：“十三五”国家重点研发项目2016YFD0501304

在线出版日期：2019-01-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：13-19