牛分枝杆菌PPE13蛋白基因的表达及其表达产物的功能分析

摘要：

为了探索PPE13蛋白在牛分枝杆菌感染宿主细胞中所发挥的具体调控作用,本研究利用分子克隆技术构建了表达PPE13蛋白的耻垢分枝杆菌重组菌株Ms_PPE13.首先采用PCR技术扩增mb0902c(PPE13)基因片段,将其克隆于载体pMN437中.挑取阳性克隆测序后,将重组质粒电转至耻垢分枝杆菌中,通过Western-blot方法检测PPE13蛋白是否在耻垢分枝杆菌中表达.然后测定重组菌株Ms_PPE13的体外生长曲线、感染该菌的巨噬细胞的死亡情况以及使用荧光定量PCR方法检测巨噬细胞内炎症相关因子IL-6、TNF-α和iNOS的表达情况,以初步探索PPE13的功能.结果显示,PPE13蛋白可在耻垢分枝杆菌中表达,并且PPE13的表达不影响耻垢分枝杆菌在体外的生长.另外,使用耻垢分枝杆菌感染巨噬细胞后,发现PPE13可促进巨噬细胞的死亡,并且促进IL-6的表达.上述研究结果为进一步探索PPE13蛋白调控牛分枝杆菌感染的具体机制提供了新的线索.

关键词：牛分枝杆菌、PPE13、耻垢分枝杆菌、巨噬细胞、细胞死亡、IL-6

所属期刊栏目：48

分类号：S852.618(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;浙江省自然科学基金;浙江农林大学科研发展基金人才启动基金

在线出版日期：2018-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1548-1553