仔猪免疫PRRSV疫苗后病毒血症的荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要：

为建立一种快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)疫苗免疫后在猪体内病毒血症持续时间的方法.根据GenBank中PRRSV基因序列,设计1对针对N基因扩增的特异性引物,经RT-PCR扩增后连接到pMD19-T载体上,构建含有N基因片段的重组质粒.采用SYBR Green I染料法进行荧光定量RT-PCR扩增,建立标准曲线并进行特异性、敏感性及重复性试验,比较分析该方法与商品化试剂盒检测结果的阳性符合率.结果显示,所构建方法的扩增效率为1.063,标准品各稀释度质粒拷贝数与Ct值之间相关系数为0.999,引物特异性强,可检测的最低核酸模板浓度为1.0×102 copies/μL,比常规PCR敏感性高10倍,重复性试验的变异系数均小于1％,与商品化试剂盒检测的阳性符合率达100％.两种方法检测结果均表明,在猪体内PRRSV疫苗病毒血症可持续3周.本研究建立的猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR具有快速、特异、敏感和重复性好等优点,可为PRRSV感染(包括疫苗毒)的调查、监测和防控提供可行性和操作性强的技术支持.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒、疫苗、N基因、荧光定量RT-PCR、病毒血症

所属期刊栏目：48

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：贵州省科技厅农业科技攻关计划;贵州省研究生工作站项目;黔科合人才团队项目

在线出版日期：2018-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1522-1528