抗山羊IgMμ链单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

将构建的山羊IgMμ链的原核表达重组质粒pET30a-IgMμ转化至大肠杆菌BL21中,诱导表达获得重组蛋白His-IgMμ;以Ni-NTA亲和层析法纯化His-IgMμ重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、抗体筛选和细胞克隆等杂交瘤细胞技术,筛选能稳定分泌抗山羊IgMμ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用小鼠腹腔诱生腹水的方法制备出抗IgMμ链单抗,并鉴定单抗的生物学特性.结果,成功构建了重组表达载体pET30a-IgMμ,诱导表达、纯化得到了目的蛋白;获得了4株能稳定分泌抗山羊IgMμ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株,4株单抗腹水的效价均达到了1×10-4以上,其中1D8、5D1和6G10株单抗亚型为IgG1,9H8株的亚型为IgG 2a,轻链均为K;1D8、5D1、6G10和9H8的亲和力平衡解离常数KD分别为1.87×10-11、8.46×10-7、4.26×10-9和4.07×10-10;经Western-blot鉴定,单克隆抗体6G10能特异性识别原核表达的His-IgMμ蛋白.上述研究结果表明,本研究获得了4株高亲和力和效价的抗山羊IgMμ链特异性单克隆抗体,这为山羊感染性疾病的早期诊断、预报预警和防控提供了基础条件.

关键词：IgM、μ链、原核表达、单克隆抗体、鉴定

所属期刊栏目：48

分类号：S852.43(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家重点研发计划

在线出版日期：2018-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1503-1510