基于分子佐剂EDA的弓形虫DNA疫苗研究

摘要：

为构建分子佐剂纤维连接蛋白外域A(EDA)与弓形虫表面膜蛋白1(SAG1)基因融合的真核表达载体并探讨其对小鼠的免疫原性,以本实验室保存的质粒为模板,进行PCR扩增,获得EDA-SAG1与SAG1目的片段,再分别连接到真核表达载体pVAX1上,构建出重组质粒pVAX1-EDA-SAG1和pVAX1-SAG1.将构建的质粒pVAX1-EDA-SAG1、pVAX1-SAG1同空载体pVAX1通过肌肉注射的方式免疫小鼠,通过ELISA、CCK-8法和小鼠攻虫试验对该DNA疫苗的免疫效果进行评价.经PCR扩增获得的SAG1片段长为855 bp,EDA-SAG1片段长为1 131 bp.双酶切和测序结果显示成功构建了上述重组质粒.在ELISA检测中,实验组血清中抗体IgG、IgG1、IgG2a水平和细胞因子IL-4、IL-10、IL-12p70及IFN-γ的质量浓度较高,与对照组相比差异显著(P＜0.05).在脾淋巴细胞增殖试验中,分子佐剂EDA-SAG1组的增殖效果最明显(P＜0.05).攻虫后,pVAX 1-EDA-SAG1实验组小鼠存活时间最长,较空白对照组多存活4d.实验组pVAX1-EDA-SAG1相对于对照组pVAX1-SAG1具有较好的免疫效果,分子佐剂EDA可以显著地增强弓形虫SAG1的免疫原性.

关键词：弓形虫、EDA、SAG1、分子佐剂、小鼠免疫保护

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分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;福建农林大学临床兽医学教学团队建设项目;福建省高校杰出青年人才培育项目;福建省高等学校新世纪优秀人才支持计划

在线出版日期：2018-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1374-1380