鉴别禽致病性大肠杆菌与禽非致病性大肠杆菌的多重PCR检测方法的建立及初步应用

摘要：

为建立一种快速鉴别禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)与禽非致病性大肠杆菌(avian non-pathogenic Escherichia coli,ANPEC)的多重PCR检测方法,本研究针对APEC的iss、cvaC、irp2、iucD、iroN和tsh共6个毒力基因的序列进行分析,分别设计合成6对特异性引物,通过正交组合法优化引物比例和梯度法确定最佳退火温度,并进一步完善方法的敏感性、特异性和判定标准,建立了一种快速灵敏检测APEC的多重PCR检测方法,并初步应用该方法对本实验室102株大肠杆菌样本进行鉴定和分群.结果显示,该多重PCR方法对菌液最低检测浓度为5×107 CFU/mL;对其他种属的4株革兰阳性菌和5株革兰阴性菌无扩增.检测实验室保存的鸭源APEC和ANPEC各10株,通过比较两者所含毒力基因的分布情况及数量,建立了多重PCR判定标准即所含毒力基因数大于等于3者为APEC阳性菌株.初步应用该方法检测实验室分离保存的23株APEC和79株ANPEC,同时进一步验证了其准确性.结果表明,APEC检出率为100％,ANPEC的检出率亦为100％.以上结果充分说明本研究建立的多重PCR特异性强、灵敏度高、简便快捷,可进一步应用于禽类的APEC与ANPEC的快速鉴别诊断和APEC的分子流行病学调查.

关键词：禽致病性大肠杆菌、禽非致病性大肠杆菌、多重PCR

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分类号：S852.612(动物医学（兽医学）)

资助基金：黑龙江省自然科学基金重点项目;上海市科委科研计划;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项

在线出版日期：2018-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1358-1364