马立克病病毒单克隆抗体的制备

摘要：

以纯化的经鸡胚成纤维细胞(CEF)培养的马立克病病毒(MDV)超强毒株GX0101病毒粒子作为免疫原,制备特异性识别MDV的单克隆抗体.GX0101感染CEF后第96小时收集细胞并反复冻融3次,离心取上清,选用100 ku的切向流超滤离心管浓缩,浓缩液通过Sepharose 4 Fast Flow (4FF)凝胶作为层析介质分离纯化MDV病毒粒子,聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量PCR分析不同收集峰MDV病毒含量,并经过透射电子显微镜观察到直径约100nm的MDV病毒粒子.进一步用100 ku的切向流超滤离心管浓缩,制备峰尖病毒浓缩液,以此免疫雌性BALB/c小鼠制备单克隆抗体.通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和Western-blot筛选,最终获得107个阳性克隆,由其中1株强阳性单克隆抗体杂交瘤细胞株10B2制备的单克隆抗体腹水IPMA效价为1:2.56×106.本研究结果为后续MDV单克隆抗体的筛选、鉴定及诊断试剂研发奠定了重要基础.

关键词：马立克病、马立克病病毒、单克隆抗体、IPMA

所属期刊栏目：48

分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家重点研发计划

在线出版日期：2018-11-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1102-1108