微小隐孢子虫P23基因真核表达质粒在HeLa细胞中的表达及其免疫小鼠血清抗体效价的检测

摘要：

为观察微小隐孢子虫P23基因真核重组质粒在HeLa细胞中的表达及免疫小鼠血清抗体产生情况,通过设计特异性引物,利用PCR技术,对微小隐孢子虫卵囊基因组DNA进行P23基因扩增;将扩增产物插入真核表达载体pVAX-1中,构建重组真核表达质粒pVAXl-P23,转染HeLa细胞,运用间接免疫荧光法及Western-blot技术,验证重组质粒在HeLa细胞中的表达情况;将重组质粒pVAXl-P23免疫小鼠,用间接ELISA检测小鼠血清特异性抗体产生情况.结果显示,成功地扩增了长度约为336 bp的微小隐孢子虫P23基因;双酶切和序列测定结果显示,构建的真核重组表达质粒pVAXl-P23中外源基因序列和插入位置正确;间接免疫荧光法及Western-blot分析显示,pVAXl-P23真核重组表达质粒在HeLa细胞中被成功表达;小鼠免疫重组质粒2周后,即可检测到抗体产生,直至第8周试验结束.结果表明成功地构建了真核重组表达质粒pVAXl-P23,该重组质粒能在HeLa细胞和小鼠体内表达,并诱导小鼠产生显著的体液免疫反应,为进一步开展隐孢子虫P23蛋白特性研究、研制抗隐孢子虫病核酸疫苗奠定了基础.

关键词：微小隐孢子虫、P23基因、真核重组表达质粒、表达、抗体

所属期刊栏目：48

分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：上海市科技兴农科技攻关计划重点项目;国家农产品质量安全风险评估项目计划;国家自然科学基金;宁夏回族自治区科技支撑计划;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项

在线出版日期：2018-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：566-573