猪四种呼吸道病原菌四重PCR检测方法的建立与应用

摘要：

为建立可同时快速检测猪支气管败血波氏杆菌(Bb)、副猪嗜血杆菌(Hps)、胸膜肺炎放线杆菌(App)和多杀性巴氏杆菌(Pm)的四重PCR方法,根据Bb的fla基因、Hps的16S rRNA基因、App的apxⅣ基因和Pm的特异性基因KMT1设计4对特异性引物,基于TaKaRa公司的Premix Taq PCR预混酶,对四重PCR的引物浓度和退火温度进行优化,确定该四重PCR的反应体系和反应条件,通过对特异性及同一种病原菌不同血清型检测的通用性、敏感性和重复性评价,建立快速检测猪这4种呼吸道病原菌的四重PCR方法,同时应用该方法对81份临床样本进行检测,检测结果与这4种病原菌单项PCR检测以及4种病原菌的分离鉴定结果进行比较.结果表明,该方法能同时对这4种病原菌进行检测,特异性和通用性好、重复性好,对这4种病原菌DNA的最低检测质量浓度为20 pg/μL,对这4种细菌的最低检出量分别为1×1o3 CFU/mL的Pm,1×102CFU/mL的Hps、Bb和App,敏感性高.81份临床样本的四重PCR检测结果和单项PCR检测结果一致,PCR检出率明显高于细菌分离鉴定结果.本研究成功建立了可同时检出猪支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌的四重PCR方法,该方法可用于临床样本的快速检测以及这4种病原菌的鉴别检测.

关键词：猪支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、四重PCR、特异性、敏感性、稳定性

所属期刊栏目：48

分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省科技计划;兽医专业学位研究生省级教育实践基地建设项目;四川省教育厅创新团队项目

在线出版日期：2018-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：288-294