绵羊肺炎支原体P130蛋白主要抗原域原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

摘要：

为建立绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)快速检测方法,本试验以绵羊肺炎支原体膜蛋白P130为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法.根据基因功能预测注释,绵羊肺炎支原体(Mo)P130蛋白显示编码大小约为130.5 ku,本试验以Mo全基因组为模板,使用PCR扩增Mo P130的基因片段,根据生物信息学软件分析,选取P130主要抗原域P130-3(693 bp),构建P130蛋白主要抗原域原核表达载体pET32a-P130-3,并转化至BL21菌,在0.8 mmol/L IPTG和37℃条件下诱导表达目的蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定.以P130-3为诊断抗原,经过优化反应条件,建立检测Mo抗体的间接ELISA方法.结果表明,表达的P130-3蛋白经鉴定大小为43ku,与预期值相符.P130-3-ELISA方法阴、阳判定临界值为:D450值=0.238,该方法与口蹄疫等阳性血清均无交叉反应,具有极强的特异性.组内变异与组间变异均小于5％,具有很好的重复性,利用该方法与兰州兽医研究所推出的间接血凝法对200份临床样本进行检测,两者的符合率在90％以上.本研究建立的Mo间接ELISA方法可用于Mo的诊断和流行病学调查.

关键词：肺炎支原体、原核表达、间接ELISA

所属期刊栏目：48

分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：内蒙古自治区科技计划项目“舍饲肉羊疫病动态防控关键技术研究”201502070

在线出版日期：2018-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：281-287