吕氏泰勒虫TlSP基因多态性免疫区在毕赤酵母中的高效分泌表达

摘要：

为研制具有完整抗原性和天然结构的吕氏泰勒虫表面蛋白TlSP(Theileria luwenshuni surface protein),采用RT-PCR方法从吕氏泰勒虫裂殖子总RNA反转录获得TlSP基因的cDNA序列,将其多态性免疫区域克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建重组质粒pPIC9K-TlSP.pPIC9K-TlSP经SalⅠ酶切线性化后,电转化导入毕赤酵母菌株GS115和KM71中,经遗传霉素G-418筛选后得到高拷贝菌株,对PCR鉴定为阳性的菌株进行甲醇诱导表达.对GS115和KM71两种菌株表达重组蛋白TlSP的效果进行评估,并对TlSP的反应原性进行了分析.结果表明,反转录获得的TlSP基因的cDNA序列长为888 bp,其中多态性免疫区域长为552 bp;筛选得到抗遗传霉素G-418 (4.0 mg/mL)的GS115菌株5株,KM71菌株7株,经PCR鉴定为阳性的2种菌株均成功表达了分泌型重组蛋白TlSP,GS115菌株的蛋白表达效果较好;重组蛋白TlSP能与吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫及环形泰勒虫阳性血清发生反应,而与巴贝斯虫、绵羊无浆体阳性血清无反应.本研究为深入研究TlSP蛋白在羊泰勒虫病免疫学诊断和亚单位疫苗中的应用奠定了基础.

关键词：吕氏泰勒虫、TlSP基因、毕赤酵母、分泌表达、反应原性

所属期刊栏目：48

分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;国家自然科学基金;肉牛体系专项

在线出版日期：2018-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：135-141