吕氏泰勒虫TlSP无跨膜区重组蛋白的表达及反应原性分析

摘要：

提取吕氏泰勒虫裂殖子的总RNA,采用RT-PCR方法扩增其表面蛋白TlSP(Theileria luwenshuni surface protein)基因的cDNA片段,结合生物信息学方法,对TlSP蛋白抗原表位和跨膜区进行预测,设计表达引物,分别扩增得到TlSP全长及逐一去除跨膜区的4个片段,并将其分别克隆至pET-30a原核表达载体,将重组质粒转入大肠杆菌BL21 (DE3)pLysS感受态细胞进行诱导表达,并对融合蛋白的反应原性进行分析.结果表明,TlSP融合蛋白的N端具有较好的抗原性,而在C端存在3个跨膜区:185～207 aa、228～250 aa和255～277 aa;SDS-PAGE结果表明,只有去除全部跨膜区的重组载体可成功表达.Western-blot分析表明,TlSP融合蛋白能与吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫及环形泰勒虫阳性血清发生反应,而与巴贝斯虫、羊无浆体阳性血清无交叉反应.本研究为今后TlSP候选亚单位疫苗的研究奠定了基础.

关键词：吕氏泰勒虫、TlSP基因、跨膜区、原核表达、反应原性分析

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分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;国家重点研发计划;国家重点研发计划;肉牛牦牛体系;国家自然科学基金

在线出版日期：2018-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1503-1509