猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂4848的鉴定及表达

摘要：

为鉴定并表达猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsSerpin),提取猪囊尾蚴总RNA,设计引物并通过RT-PCR技术扩增TsSerpin4848基因,将纯化的PCR产物连接到pMD19-T载体后转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,筛选阳性克隆并测序,并用生物信息学方法分析其序列和结构特征.构建pET-30a(+)-4848重组表达载体,经酶切鉴定及测序验证后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,目的蛋白纯化后进行SDS-PAGE和Western-blot分析.结果表明,TsSerpin4848的开放阅读框由1 065个核苷酸组成,编码355个氨基酸残基,其理论分子质量约为39 ku.TsSerpin4848含有serpin家族保守序列DEEGAE和FIVDHPFLFFI,并含有serpin特有的反应中心环结构域,其三级结构中有8个a螺旋和3个β折叠;重组TsSerpin4848蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在,可被猪囊尾蚴阳性血清识别,表明TsSerpin4848蛋白具有良好的反应原性,有望作为猪囊虫病诊断的候选抗原.

关键词：猪带绦虫、丝氨酸蛋白酶抑制剂、鉴定、表达、候选抗原

所属期刊栏目：47

分类号：S852.734(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;国家自然科学基金

在线出版日期：2018-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1486-1491