牛轮状病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

为建立快速特异的定量检测牛轮状病毒的荧光定量PCR方法,本研究从牛轮状病毒NCDV株DNA中扩增的VP6基因片段(211 bp)并克隆于pMD19-T载体(pMD19-T-VP6)作为重组质粒标准品,建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.结果表明,VP6片段长211 bp,经鉴定所构建的重组质粒成功;用该质粒测得real-time PCR的最低检测量为15.39 copies/μL.用该方法检测猪传染性胃肠炎病毒、牛细小病毒、猪流行性腹泻病毒及伪狂犬病病毒的结果均为阴性,表明其具有良好的特异性.重复性试验结果表明,批内和批间重复变异系数均小于3％,表明该方法具有良好的重复性.以上结果表明,本研究建立的基于VP6基因的牛轮状病毒qRT-PCR检测方法具有特异、灵敏、快速等特点,可用于牛轮状病毒的早期诊断.

关键词：牛轮状病毒、VP6基因、实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：47

分类号：S852.659.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2016YFD0500904

在线出版日期：2017-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：750-754