鸡IFN-γ单克隆抗体的制备及其识别区的鉴定

摘要：

IFN-γ是鸡体内一种重要的细胞因子,为制备鸡IFN-γ的单克隆抗体,以chIFN-γ-His融合蛋白免疫BALB/c小鼠,经3次免疫后分离出脾细胞与骨髓瘤细胞系(SP2/0)进行融合,经单克隆培养,筛选得到4株能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为2A10、2B10、4D10和4F9.应用间接ELISA方法鉴定4株单抗的重链类型分别为IgG2a、IgG1、IgG1和IgG2b.通过间接ELISA方法测定4株单抗的亲和力解离常数(Kd)分别为1.06×10-10、7.35×10-10、1.10×10-10和9.34×10-10,表明4株单抗均为高亲和力抗体.将chIFN-γ的C端、N端同时进行表达,应用Western-blot方法鉴定4株单抗的抗原识别表位分别为chIFN-γ的47-100位氨基酸,101-145位氨基酸和1-46位氨基酸.应用Western-blot方法鉴定4株单抗的特异性,4株单抗均能识别原核表达的重组蛋白chIFN-γ,而不识别鸡chIL-2、chIL-4、chIL-10蛋白,表明4株单抗特异性良好.原核表达chIFN-γ蛋白制备单克隆抗体效果良好,为进一步研究chIFN-γ的功能奠定了基础.

关键词：鸡IFN-γ、原核表达、单克隆抗体

所属期刊栏目：47

分类号：S852.42(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;现代农业产业技术体系建设专项

在线出版日期：2017-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：721-726