鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体的制备

摘要：

为制备特异性的鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体(mAb),利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增鸡p21基因,将其克隆入原核表达载体pET-30a中,随后转化进入BL21 (DE3)中,利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离.切胶研磨,将收集的鸡p21蛋白腹腔免疫BALB/c小鼠,三免后,选取抗体阳性的小鼠脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合并筛选单抗.结果显示,经亚克隆纯化,共筛选获得12株阳性杂交瘤细胞株,即1B12、1E12、1H7、2B5、2C5、2C8、2D8、2F2、3C11、3D6、3G7和4G6.利用间接免疫荧光(IFA)、酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹检测单抗效价.成功制备了特异性鸡p21单抗.这为进一步研究鸡p21生物学功能奠定了基础.

关键词：鸡、p21、单克隆抗体、原核表达

所属期刊栏目：47

分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;江苏省自然科学基金青年项目;教育部留学回国人员科研启动基金;中央高校基本科研业务费专项;中央高校基本科研业务费专项;江苏高校优势学科建设工程项目

在线出版日期：2017-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：701-706