犬流感病毒NP基因在昆虫细胞中的表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

摘要：

旨在利用昆虫细胞表达犬流感病毒(CIV)核蛋白(NP),并以此作为抗原建立检测CIV抗体的间接ELISA方法.从CIV感染的MDCK细胞中提取总RNA,用RT-PCR法扩增NP基因,连接到pFastBacHTA载体上,转化含Bacmid的DH10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒NP-DH10,穿梭质粒转染sf-9昆虫细胞,获得重组病毒P1-NP.病毒传至第3代后,用Western-blot及IFA鉴定昆虫细胞表达的蛋白与兔抗犬流感病毒NP蛋白多克隆抗体及鼠抗CIV血清发生特异性反应.NP蛋白纯化后作为抗原,建立检测CIV抗体的间接ELISA方法.优化后确定蛋白最佳包被浓度为2 μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100.用建立的间接ELISA方法和血凝抑制(HI)同时检测136份血清样品,ELISA法检出129份阳性,检出率为94.85％;HI检出120份阳性,检出率为88.23％,二者符合率为93.38％,ELISA检测方法的阳性率高于血凝抑制.结果表明,利用昆虫细胞表达的NP蛋白做为抗原,建立的检测GIV抗体的间接ELISA方法特异性好,重复性高,可用于犬流感的诊断和流行病学调查.

关键词：犬流感病毒、NP蛋白、杆状病毒表达系统、间接ELISA

所属期刊栏目：47

分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家国际科技合作专项基金;国家重点研发计划;公益性行业农业科研专项;江苏省农业科技自主创新项目;江苏高校优势学科建设工程项目

在线出版日期：2017-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：680-686