藏猪IGF-1成熟肽真核表达载体的构建及其在毕赤酵母GS115中的表达

摘要：

构建藏猪IGF-1成熟肽基因的真核表达载体,通过毕赤酵母表达系统获得具有生物活性的IGF-1成熟蛋白.根据GenBank中猪IGF-1基因设计1对引物,以构建的藏猪pMD19-T-IGF-1重组质粒为模板,克隆IGF-1成熟肽基因,并将其克隆于表达载体pPIC9k,获得重组穿梭质粒pPIC9k-IGF-1,电转毕赤酵母GS115感受态,对重组酵母转化子经MM、MD平板筛选和PCR鉴定后,经G418抗性梯度筛选,获得多拷贝重组菌株,甲醇诱导表达后进行Tricne-SDS-PAGE和Dot blot分析.Tricne-SDS-PAGE和Dot blot分析显示,表达的目的蛋白分子质量约为13 ku,获得成功表达;CCK8法检测显示,纯化后的IGF-1重组蛋白能够促进细胞增殖.表明,本研究成功构建了藏猪IGF-1成熟肽真核表达质粒pPIC9k-IGF-1,并在毕赤酵母GS115中得到了有效表达,表达产物具有促进细胞增殖的生物活性.

关键词：藏猪、胰岛素样生长因子、成熟肽、真核表达、生物活性

所属期刊栏目：47

分类号：S859.793(动物医学（兽医学）)

资助基金：教育部长江学者奖励计划项目;创新团队发展计划;四川省高等学校科技创新团队资助项目

在线出版日期：2017-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：664-670