山羊关节炎-脑炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

摘要：

为建立检测山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)血清抗体的间接ELISA方法,采用PCR方法扩增山羊关节炎-脑炎病毒CA蛋白编码基因序列,然后克隆至原核表达载体pET-28a(+),诱导含有重组载体pET-28a(+)-CA的大肠杆菌BL21(DE3)表达重组蛋白rHis-CA.采用Ni柱亲和层析方法纯化重组蛋白rHis-CA,并以纯化的rHis-CA为包被抗原建立检测山羊关节炎-脑炎血清抗体的间接ELISA方法.结果表明重组蛋白rHis-CA以包涵体形式表达,具有良好的反应原性.所建立的rHis-CA间接ELISA方法的最适抗原包被质量浓度和血清稀释度分别为0.4 μ g/mL和1∶100,血清阴阳性的D450临界值为0.45.该方法仅与山羊关节炎-脑炎病毒阳性血清发生特异性反应,不与山羊痘病毒、蓝舌病病毒和口蹄疫病毒阳性血清发生交叉反应.对来自陕西地区的48份山羊血清进行CAEV抗体检测,rHis-CA ELISA和琼脂凝胶免疫扩散试验的阳性检出率分别为35.41％ (17/48)和31.25％(15/48).对来自天津地区2个山羊场的240份山羊血清样本进行CAEV抗体检测,rHis-CA ELISA方法和琼脂凝胶免疫扩散试验的检测结果均为阴性.

关键词：山羊关节炎-脑炎、重组CA蛋白、间接酶联免疫吸附试验

所属期刊栏目：47

分类号：S852.659.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家质检总局科技计划项目2011IK016

在线出版日期：2017-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：563-568