猪Delta冠状病毒和猪流行性腹泻病毒双重RT-PCR诊断方法的建立及初步应用

摘要：

自2014年美国首次报道猪Delta冠状病毒(PDCoV)以来,该病毒相继在我国一些猪场检测到,由于其发病症状和病理剖检与猪流行性腹泻(PED)极其相似,且易出现混合感染,临床很难区分,给养殖业造成严重经济损失,因此建立能够同时检测且能区分这两种病毒感染的诊断方法,对于临床实践具有重要意义.根据GenBank中登录的PDCoV和猪流行性腹泻病毒(PEDV)基因序列,设计了2对分别用于扩增PDCoV N基因和PEDV M基因的目的片段的引物,通过对RT-PCR反应条件进行优化,建立了同时检测PDCoV和PEDV的双重RT-PCR检测方法,并对该方法进行了灵敏性、特异性和重复性研究.结果显示,该双重RT-PCR对PD-CoV和PEDV的最低检测量分别是3.14×103 copies/μL和3.88×104 copies/μL.该方法仅对PDCoV和PEDV检测为阳性,对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、博卡病毒(PBoV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪伪狂犬病毒(PRV)等猪常见的感染病毒的扩增均为阴性,说明该方法具有较好的特异性.用建立的双重RT-PCR方法对111份临床样品进行检测,其中PDCoV阳性样品22份,阳性率为19.82％,PEDV阳性样品27份,阳性率为24.32％,PDCoV和PEDV共感染的样品数为10份,阳性率为9.01％.本试验所建立的双重RT-PCR方法能够快速、准确地对PDCoV和PEDV单一或混合感染的临床样品进行快速检测,为临床上对PDCoV和PEDV鉴别诊断和流行病学调查研究提供了新的技术手段.

关键词：猪Delta冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、双重RT-PCR

所属期刊栏目：47

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;河南省科技开放合作项目

在线出版日期：2017-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：557-562