大片吸虫α-微管蛋白基因的克隆表达及免疫反应性的研究

摘要：

为鉴定大片吸虫α-微管蛋白基因(FgAT),并分析其作为诊断抗原的可行性,根据肝片吸虫的基因组及转录组数据设计α-微管蛋白基因的扩增引物,以大片吸虫总RNA为模板,通过RT-PCR获得大片吸虫的FgAT基因;对其进行生物信息学分析及鉴定,然后构建pGEX-6P-1(+)-FgAT重组表达载体,在大肠杆菌BL21 (DE3)中进行诱导表达,再对纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析.结果表明,大片吸虫FgAT基因的大小为1 356 bp,编码452个氨基酸残基.生物信息学分析表明,FgAT二级结构预测以无规卷曲为主,抗原表位在整个序列中均有存在.优化后的α-微管蛋白为可溶性表达,Western-blot分析结果表明其具有良好的免疫反应性.本研究首次克隆并鉴定了大片吸虫α-微管蛋白基因,表达的重组蛋白具有良好的免疫反应性,该蛋白是潜在的大片吸虫诊断靶标.

关键词：大片吸虫、α-微管蛋白基因、表达、诊断候选抗原

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分类号：S852.735(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）973;2015CB150300

在线出版日期：2017-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：495-499