猪流行性腹泻病毒恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立

摘要：

本研究旨在建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的恒温隔绝式PCR(iiPCR).采用靶向PEDV S基因的引物和探针,通过对引物、探针、Taq酶及反转录酶等进行优化,建立了检测PEDV的iiPCR,对其特异性、敏感性和稳定性进行评价,对15份PEDV阳性样本和7份阴性样本进行检测,比较与现有的荧光定量RT-PCR方法的符合率,并对115份仔猪腹泻样本进行检测.结果显示,iiPCR的最佳反应体系为:上、下游引物各3.5 μL、探针0.25 μL、Taq酶1 μL、反转录酶1.25 ttμL、BufferA 25 μL、模板2 μL,补足DEPC水至50μL,从样本处理到报告结果仅需lh;该方法能检出样本中的PEDV,对TGEV、PPV、CSFV等无关病原不检出,检测下限为17.5 copies/μL,对5个稀释度的阳性标准品进行检测,3次重复结果一致,与现有荧光定量RT-PCR的总符合率为90.9％;本研究建立的iiPCR对仔猪腹泻样本中PEDV的检出率为22.6％(26/115).综上可见,本研究成功建立了检测PEDV的iiPCR,为PED的诊断提供了更为便捷并可现场使用的可靠方法.

关键词：猪流行性腹泻病毒、恒温隔绝式PCR、快速现场诊断

所属期刊栏目：47

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2016YFD0500705

在线出版日期：2017-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：466-470