一种改进的高效模拟抗原表位噬菌体的筛选方法

摘要：

以抗红斑丹毒丝菌多克隆抗体为研究对象,首先加入噬菌体与抗体作用,保证目的噬菌体与抗体的高效结合,再通过蛋白A和蛋白G能快速、高亲和力吸附抗体Fc段的特性,将抗体-噬菌体复合物固定在酶标孔中;经洗涤和洗脱后将筛选的噬菌体稀释,分装到10决96孔培养板中扩增.第1轮筛选所获得的噬菌体种类一般少于l×104个,经约1 000倍稀释后,每个酶标孔中扩增的噬菌体少于10个,这将极大地降低噬菌体因竞争扩增而丢失的概率,甚至无噬菌体丢失.结果显示,相比于传统方法从224个样品中获得36个多肽,本次从100个样品中就获得了72个多肽.同时,为满足大量噬菌体样品的验证工作,采用加入40mL/L吐温-80的培养基在10 mL离心管中以2mL体积扩增噬菌体,最终的噬菌体效价提高了317％,总量超过8×1010,足以满足后续试验的要求.该改进的方法可以显著提高噬菌体筛选的效率,可操作性强,具有广泛的普遍适用性.

关键词：噬菌体展示、模拟抗原表位、多样性、扩增

所属期刊栏目：47

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：湖南省科技厅重点项目2011FJ2017

在线出版日期：2017-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：82-87