绵羊肺腺瘤病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与验证

摘要：

根据GenBank上发表的外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)的基因序列,分别设计合成巢式RT-PCR引物及扩增exJSRV-env全基因的引物,建立exJSRV的检测方法.将病肺的巢式外套与内套RT-PCR扩增产物与载体连接,对重组质粒送检测序进行序列分析.结果显示,巢式外套与内套RT-PCR扩增产物的序列与JQ837489.1序列的同源性分别为99.7％和99.4％.通过对3份鼻液以及75份血样的临床检测,将检测阳性的1份鼻液和2份血样送检测序,序列比对结果显示,鼻液、血样的巢式外套和内套RT-PCR扩增产物与JQ837489.1的同源性分别为99.8％、99.7％、99.7％和98.9％、100％、99.4％,且扩增基因序列的氨基酸序列中具有exJSRV特有的致病性YXXM序列.敏感性试验表明,巢式RT-PCR诊断方法的敏感性是普通RT-PCR的10倍,最低能够检测出9.72 fg的标准模板RNA.说明本试验所建立的方法,具有良好的临床应用价值,灵敏性高、特异性好,对exJSRV的临床早期检测提供了一种方便、可靠、经济实用的诊断方法.

关键词：绵羊肺腺瘤病、巢式PCR、外源性绵羊肺腺瘤病毒、内源性绵羊肺腺瘤病毒

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分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;内蒙古科技厅应用研究项目;内蒙古自治区"草原英才"工程创新团队项目

在线出版日期：2017-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：23-30