类弹性蛋白多肽融合犬β干扰素的表达纯化和抗病毒活性及体外半衰期的研究

摘要：

为了研制长效犬β干扰素(CaIFNb)基因工程产品,用聚合酶链反应从犬基因组DNA扩增CaIFNb成熟肽编码序列,插入类弹性蛋白多肽(ELP)融合表达载体,将重组载体转化大肠杆菌BLR(DE3),用IPTG诱导CaIFNb-ELP表达,利用ELP介导的温度敏感可逆相变循环(ITC)进行纯化,用50％细胞病变抑制试验检测干扰素活性,用50％小鼠血浆孵育法检测体外半衰期,并与融合组氨酸标签的His-CaIFNb进行比较.结果显示,在≤28℃条件下,90％ CaIFNb-ELP为可溶性表达,His-CaIFNb以不溶性包涵体表达;在优化条件下进行1轮ITC,获得的CaIFNb-ELP的纯度为96％,显著高于以包涵体纯化的His-CaIFNb的纯度(85％);CaIFNb-ELP的抗病毒活性为1×105U/mg,比His-CaIFNb的抗病毒活性高10倍;CaIFNb-ELP的体外半衰期＞24 h,显著长于His-CaIFNb的体外半衰期(12h).结果表明,CaIFNb-ELP具有表达水平高、纯化简单和体外半衰期较长等优点,有望作为长效干扰素开发利用.

关键词：大β干扰素、类弹性蛋白多肽、融合表达

所属期刊栏目：46

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：江苏高校优势学科建设工程项目PAPD;江苏省人兽共患病学重点实验室资助项目

在线出版日期：2017-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1543-1549