家兔出血症病毒VP60基因特异性噬菌体展示肽库的构建及鉴定

摘要：

本研究旨在构建家兔出血症病毒VP60基因特异性噬菌体展示肽库,并选用已知表位序列的单克隆抗体对VP60基因特异性肽库进行鉴定,以确定所构建肽库的特异性和丰富性.利用DNA酶Ⅰ随机消化法构建VP60基因噬菌体随机肽库.采用生物淘选和噬菌体原位杂交技术,选用1B8、1D4、5H3和A3C 4株纯化的单克隆抗体对该肽库进行抗原表位的鉴定.结果显示,所构建多肽库的滴度约为2.6×1012 PFU/mL,能够满足鉴定VP60蛋白的抗原表位的要求,同时鉴定到4条与VP60蛋白高度同源的序列,分别为N(326)PISQV(331)、D(338)MSFV(342)、K(562)STLVFNL (569)和G(25)TTTDGMDPGVVAA(38),与已知单抗所对应的表位序列高度同源.本研究成功构建了家兔出血症病毒VP60基因特异性随机肽库,选用已知表位序列的单克隆抗体对构建的肽库进行鉴定,鉴定到的表位与目前已经报道的单抗针对的表位序列高度同源,表明所构建肽库的特异性和丰富性良好,为进一步筛选和丰富VP60抗原表位奠定基础,还可用于VP60与受体结合域的鉴定,对阐述RHDV的感染、致病和免疫保护机制具有重要意义.

关键词：家兔出血症病毒、VP60基因、特异性噬菌体展示肽库

所属期刊栏目：46

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：现代农业产业技术体系建设项目兔体系病毒病预防与控制岗位项目;国家自然科学基金;江苏省自然科学基金

在线出版日期：2017-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1511-1517