鲤疱疹病毒2型ORF5截短基因的克隆表达及免疫原性研究

摘要：

根据GenBank上已登录的鲤疱疹病毒2型的ORF5基因序列(登录号:AFJ20457.1)设计1对引物,采用PCR扩增技术获得目的基因.序列分析表明,目的基因长357 bp,是一个完整的开放阅读框,编码119个氨基酸,理论分子质量为13 059.70 u,无信号肽,无跨膜区,含有4个抗原表位.将扩增片段克隆至原核表达载体pET-32a中,并将获得的重组质粒转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达.对表达蛋白进行复性纯化后免疫小鼠和异育银鲫,SDS-PAGE和Western-blot检测分析表明,重组蛋白的分子质量约为33 ku,与预期相符,表达形式为包涵体,该蛋白能够与抗His标签的抗体发生特异性反应,也能识别病毒粒子上的ORF5蛋白.对免疫的异育银鲫进行攻毒,结果显示注射生理盐水组的银鲫保护率为0,注射15、25、50μg重组蛋白组的保护率分别为20％、30％、35％,表明免疫重组蛋白组的保护率高于对照组.本研究证实了表达的融合蛋白具有一定的免疫原性,丰富了鲤疱疹病毒2型ORF5基因及基因组的研究,为研发制备新型鲤疱疹病毒2型的疫苗和诊断试剂盒奠定了基础.

关键词：鲤疱疹病毒2型、ORF5截短基因、序列分析、克隆表达、攻毒保护试验

所属期刊栏目：46

分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川出入境检验检疫局项目;四川出入境检验检疫局项目;四川出入境检验检疫局项目

在线出版日期：2016-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1394-1400