同时检测PEDV和TGEV及PDCoV的多重RT-PCR方法的建立及初步应用

摘要：

为建立一种同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪Delta冠状病毒(PDCoV)的多重RT-PCR方法,根据GenBank中PEDV和TGEV基因序列保守区设计2对引物,参照文献合成1对PDCoV引物,优化三对引物在同一RT-PCR扩增体系下的浓度、退火温度等反应条件,同时优化方法的灵敏度、特异性.将初步建立的多重RT-PCR方法用于检测采自四川省及重庆市14个猪场的222份样品.结果表明,本试验建立的多重RT-PCR在引物量分别为PEDV 0.2 μL,PDCoV 0.2 μL和TGEV 0.4μL,退火温度为53℃时的扩增效果最佳;最低检测量分别为PEDV:60.96 pg、PDCoV:58.85 pg、TGEV:102.69 pg;用该法对多种猪传染病病原DNA或cDNA进行扩增时均无非特异性扩增条带出现.对222份腹泻样品的检测结果表明,PEDV阳性检出率为52.2％,PDCoV为2.7％,TGEV为2.3％.同时多重RT-PCR检测方法和单项RT-PCR检测方法符合率分别为PEDV 92.9％、PDCoV 100％、TGEV 100％.表明该法具较高可信度.本试验建立了一种高效、特异地同时检测PEDV、TGEV和PDCoV的多重RT-PCR方法,为病原的实验室诊断和分子流行病学调查提供了技术支持.对四川省及重庆市部分猪场三种病原流行情况进行调查和统计分析,为地区猪腹泻病的防控提供了依据.

关键词：多重RT-PCR、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪Delta冠状病毒、检测

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分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：“十二五”国家高技术研究发展计划863项目2012AA101304;四川省教育厅项目14ZB046;四川省青年基金项目2014JQ0044;兽医专业学位研究生省级教育实践基地建设项目

在线出版日期：2016-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：756-762