牛分枝杆菌HBHA-HSP65融合黏附素蛋白对小鼠的免疫保护力

摘要：

本研究以牛分枝杆菌valleeⅢ菌株的基因组DNA为模板,PCR扩增hbha和hsp65基因,采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得融合基因hbha-hsp65,构建重组表达质粒pET-hsp65、pET-hbha、pET-hsp65-hbha,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达.表达蛋白纯化后与等体积的弗氏不完全佐剂混合,制备成浓度为150 μg/mL的HBHA-HSP65亚单位疫苗.用其免疫BALB/c小鼠,评价其免疫保护效力.结果显示,表达蛋白的分子质量分别为65、28、95 ku,主要以可溶状态存在;ELISA测定的HBHA-HSP65的血清抗体效价达1∶16000,显著高于HBHA、HSP65和BCG组(P＜0.05);经MTT法测定,平均刺激指数为2.45,HBHA-HSP65组显著高于HSP65 (P＜0.05)、HBHA和BCG免疫组(P＜0.0l)和PBS (P＜0.01);HBHA-HSP65的脾、肺荷菌量检测结果显示,该亚单位疫苗可明显降低牛分枝杆菌在小鼠脾的荷菌量(P＜0.05),几乎完全切断对肺的感染(P＜0.01).结果表明,HBHA-HSP65亚单位疫苗能够在小鼠体内激发细胞免疫和体液免疫应答,对牛分枝杆菌感染小鼠有一定的预防保护效果,具有良好的免疫原性.

关键词：牛分枝杆菌、HBHA-HSP65、疫苗、保护力

所属期刊栏目：46

分类号：S852.618(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;甘肃省农业生物技术专项;甘肃农业大学伏羲杰出人才项目;国家奶牛产业技术体系项目

在线出版日期：2016-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：737-742