猪流行性腹泻病毒ORF3蛋白的生物信息分析及截短原核表达的研究

摘要：

为有效表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的ORF3蛋白并检测表达产物的生物活性,开展了ORF3蛋白相关的生物信息分析(包括遗传进化分析、跨膜区、亲水性、抗原表位、二级结构等),以预测结果为依据,选取抗原区域进行了截短原核表达.根据CV777株的ORF3基因序列,设计了1对特异性引物,以RTPCR扩增了大小为342 bp的ORF3截短基因片段,将扩增的ORF3基因插入pET-22b(+)载体中构建了原核表达质粒pET-22 b(+)-ORF3.确定了最佳表达条件为诱导温度25℃、诱导时间4h、IPTG浓度1.2mmol/L,表达的蛋白主要以包涵体形式存在,大小约18 ku.Western-blot和ELISA试验证明,该蛋白与PEDV阳性血清有良好的反应性.

关键词：猪流行性腹泻病毒、ORF3基因、截短、原核表达

所属期刊栏目：46

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;公益性行业农业科研专项

在线出版日期：2016-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：723-730