兔出血症病毒与兔出血症病毒2型复合RT-PCR检测方法的初步研究

摘要：

为建立用于兔出血症病毒(RHDV)与兔出血症病毒2型(RHDV2)鉴别诊断的检测方法.根据GenBank已公布的RHDV和RHDV2的VP60基因,设计合成6对特异性引物和10条搭桥引物,采用RT-PCR和搭桥PCR技术分别获取RHDV和RHDV2的VP60基因中保守区片段,构建重组质粒pMD-19T-RHDV2、pMD-19T-RHDV441和pMD-19T-RHDV294,并以其为模板,经过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及人工感染RHDV样品和临床样品的应用,对RHDV与RHDV2的复合RT-PCR检测方法进行了初步研究.结果显示,建立的RHDV与RHDV2复合RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可分别扩增出RHDV和RHDV2的VP60保守区基因片段大小为294 bp和435 bp,RHDV与RHDV2的检测限度分别为160和230个拷贝的靶基因片段,而pGM-T-EBHSV(已构建)、兔巴氏杆菌、兔源大肠杆菌和沙门菌等病原的检测结果均为阴性.样品检测结果显示,人工感染样品的RHDV检出率为100％(5/5),30份临床检样RHDV和RHDV2检测结果均为阴性.

关键词：兔出血症病毒、兔出血症病毒2型、RT-PCR、搭桥PCR

所属期刊栏目：46

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;教育部长江学者奖励计划项目;创新团队发展计划;四川省科技支撑计划;四川农业大学双支计划

在线出版日期：2016-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：710-716