牛IFN-α基因在食品级乳酸乳球菌中的表达及鉴定

摘要：

本研究旨在构建能够表达牛α干扰素(IFN-α)基因的重组乳酸乳球菌.根据乳酸乳球菌密码子的偏好性对牛IFN-α的成熟肽编码基因序列进行了优化合成,得到IFN-α基因3”端添加6个组氨酸密码子的重组质粒pUC57-IFN-α,以此重组质粒为模板,通过PCR扩增得到上下游分别带有Nco Ⅰ和Spe Ⅰ酶切位点的目的片段,双酶切后与表达载体pNZ8149连接,连接产物转化乳酸乳球菌NZ3900感受态细胞,得到的重组质粒通过PCR扩增、酶切鉴定分析以及测序分析表明,重组表达载体构建成功,将重组菌命名为NZ3900/pNZ8149-IFN-α.对重组菌使用nisin诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,可见在约20 ku处有明显差异性条带,Western-blotting检测其为特异性条带,间接免疫荧光检测重组菌有特异性荧光.本试验成功构建了重组表达载体pNZ8149-IFN-α,并使其在乳酸乳球菌中获得表达,这为牛IFN-α作为口服抗病毒药物和免疫增强剂的开发以及应用奠定了基础.

关键词：乳酸乳球菌、牛、IFN-α基因、表达、鉴定

所属期刊栏目：46

分类号：S852.611(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863项目2011AA10A211;国家生猪现代产业技术体系项目CARS-36-06B

在线出版日期：2016-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：611-615