猪流感病毒NS1蛋白关键氨基酸位点突变对蛋白定位及细胞因子水平的影响

摘要：

为探析猪流感病毒NS1蛋白中影响细胞定位和拮抗干扰素表达的关键氨基酸位点,本研究利用点突变技术扩增A/swine/Shanghai/1/2007 (H1N2)分离株NS1突变基因,并构建重组表达质粒pCAGGS-NS1及突变体pCAGGS-NS1S42P、pCAGGS-NS1D92E、pCAGGS-NS1S42P/D92E.将重组真核表达质粒转染细胞,SDS-PAGE和Western-blot均证实NS1蛋白及其突变体蛋白在A549和293T细胞中成功表达.间接免疫荧光试验表明,NS1及其突变体蛋白均主要分布在A549细胞核中,仅有少量分布于细胞浆.此外,试验证明另一株A/swine/Shanghai/3/2014 (H1N1)分离株的NS1及其突变体蛋白也主要分布于细胞核中,说明点突变不影响SIV NS1蛋白的细胞定位.进一步利用荧光定量PCR和ELISA方法检测A/swine/Shanghai/1/2007(H1N2)分离株NS1点突变蛋白拮抗细胞中干扰素表达的影响,结果表明,pCAGGS-NS1S42P转染组能够明显增强IFN-β mRNA、IFN-α mRNA转录水平(P＜0.01;0.01＜P ＜0.05),但对TNF-α mRNA转录水平无明显影响(P＞0.05).而pCAGGS-NS1D92E和pCAGGS-NS1 S42P/D92E转染组细胞IFN-α、IFN-β和TNF-α mRNA转录水平均无明显变化(P＞0.05).试验证实NS1蛋白第42位氨基酸对拮抗宿主细胞中IFN-α/β表达具有重要作用.

关键词：猪流感病毒、NS1蛋白、氨基酸位点、细胞定位、细胞因子

所属期刊栏目：46

分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：沪农科基字第3-3号;沪农青字第号;上海市生猪产业技术体系岗位专家项目2014;2014

在线出版日期：2016-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：558-562