表达NDV HN蛋白的减毒雏沙门菌△crpC79-13(pcDNA3.0-HN)的构建及生物学特性研究

摘要：

为了构建表达鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白的重组减毒雏沙门菌,以pMD18-HN为模板,经PCR扩增出HN基因后定向插入真核表达载体pcDNA3.0中,构建重组质粒pcDNA-3.0-HN,再通过电转化的方法将重组质粒转入雏沙门菌△crpC79-13中,构建重组减毒雏沙门菌△crpC79-13(pcDNA3.0-HN),并进一步研究其生物学特性及侵染Vero细胞后HN蛋白在细胞内的表达情况.PCR和酶切结果显示,重组菌△crpC79-13(pcDNA3.0-HN)构建成功;生物学特性结果显示,重组菌失去了利用麦芽糖、丙三醇和山梨醇及分解H2S等的能力,生长速度显著地低于野生株C79-13,且可稳定遗传HN基因;间接免疫荧光试验结果显示,在重组菌侵染Vero细胞后第48小时可检测到HN蛋白特异性荧光.雏鸡口服攻毒试验结果表明,重组菌△crpC79-13 (pcDNA3.0-HN)的半数致死量约为野生株C79-13的421.6×106倍.以上结果表明,本研究成功构建了能瞬时表达NDVHN蛋白的口服重组减毒雏沙门菌,为进一步将其开发为新型鸡白痢-新城疫基因工程口服活疫苗奠定了基础.

关键词：减毒雏沙门菌、新城疫病毒、血凝素-神经氨酸酶、生物学特性、口服疫苗

所属期刊栏目：46

分类号：S852.612(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;科技攻关计划重点项目;河南科技大学研究生创新项目

在线出版日期：2016-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：290-295