四种家兔呼吸道疾病病原多重PCR方法的建立与应用

摘要：

为建立同时检测家兔肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)、兔病毒性出血症病毒(RHDV)、多杀性巴氏杆菌(P.multocida)和支气管败血波氏杆菌(B.bronchiseptica)的多重PCR方法,根据GenBank中肺炎克雷伯菌的16S rRNA基因、RHDV的VP60基因、多杀性巴氏杆菌的ktml基因和支气管败血波氏杆菌的ptxA基因的保守序列设计4对特异性引物,优化反应体系与反应条件,建立能同时扩增兔肺炎克雷伯菌(127bp)、RHDV (322 bp)、多杀性巴氏杆菌(457 bp)和支气管败血波氏杆菌(872 bp)相应基因的四重PCR方法.结果显示,该方法能单管同时特异性检测兔源肺炎克雷伯菌、RHDV、多杀性巴氏杆菌与支气管败血波氏杆菌,且对兔源金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌与魏氏梭菌等无特异性扩增,说明该方法具有较强的特异性.该方法的灵敏度分别为9.16、7.24×10-3、7.96、6.8×10-1 pg/μL.采用建立的方法对人工感染试验病例与临床样本检测结果表明,该方法能快速、特异地鉴别诊断4种病原的单独与混合感染,与单一PCR方法相比,无显著性差异(P＞0.05).该方法的建立为临床上鉴别诊断4种家兔呼吸道疾病病原提供了重要的技术手段.

关键词：兔病毒性出血症病毒、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌、多重PCR、家兔

所属期刊栏目：46

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省科技支撑计划项目2016NZ0002

在线出版日期：2016-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：275-281