猪萨佩罗病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

摘要：

为建立猪萨佩罗病毒(PSV)的检测方法,根据GenBank中PSV的5 '端非编码区基因的保守序列设计并合成1对针对PSV的特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅡ检测PSV的实时荧光定量RT-PCR方法.结果显示,该方法能很好地将PSV与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪嵴病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒区分开,特异性强.检测下限为6.37×102 copies/μL,比普通PCR敏感100倍,敏感性高.扩增产物的熔解曲线分析只有1个单特异峰.所建立的实时荧光定量RT-PCR的批内变异系数为0.44％～1.14％,批间变异系数为0.70％～1.32％,重复性较好.应用该方法对采集自四川省部分地区的58份有腹泻症状的猪粪便进行检测,实时荧光定量RT-PCR检测阳性率为56.9％,与常规PCR检测方法的阳性符合率为100％.结果表明,本研究建立的实时荧光定量RT-PCR特异性较强、灵敏度高,可用于该病毒的临床检测、定量分析及流行病学调查.

关键词：猪萨佩罗病毒、SYBR Green Ⅱ、实时荧光定量RT-PCR

所属期刊栏目：45

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省科技支撑计划;国家国际科技合作专项基金;长江学者和创新团队发展计划

在线出版日期：2015-10-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：937-942