猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

摘要：

为了建立一种定量检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的实时荧光定量PCR方法,用RT-PCR扩增TGEV的M基因片段,构建含有TGEV M基因片段的重组质粒.用系列稀释后的重组质粒为模板,基于SYBR GreenⅠ来进行检测TGEV的实时荧光定量PCR扩增.结果显示,扩增效率为103.0％,相邻扩增曲线之间间距均匀,所有产物的熔解曲线具有单一整齐的峰,标准曲线具有优良的线性关系,最低可准确检测63 copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于3％.用建立的PCR对3种常见猪源RNA病毒的检测结果均为阴性,对65份临床样品的检出率高于常规PCR.结果表明,建立了一种灵敏度高、特异性强、重复性好的检测TGEV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,可用于TGEV的定量检测和猪传染性胃肠炎的早期快速诊断.

关键词：猪传染性胃肠炎病毒、SYBR GreenⅠ、荧光定量PCR、早期快速诊断

所属期刊栏目：45

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：天津市宁河原种猪场科技计划2011

在线出版日期：2015-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：644-648