表达牛分枝杆菌esat-6和cfp-10基因的重组流产布氏杆菌S19疫苗株的构建及毒力评估

摘要：

通过overlap PCR扩增了含有bp26基因上游片段、bp26基因下游片段及牛分枝杆菌esat6-cfp10基因的目的片段Δbp26-ec,利用含有sacB基因的自杀质粒pRE112为栽体,通过等位基因交换的方法,将构建好的自杀质粒电转入已经构建好的缺失bp26基因的流产布氏杆菌减毒活疫苗S19突变株中,构建了具有非抗性基因标记的突变株S19-Δbp26-ec,并对构建好的新型基因突变株进行了生物学特性及毒力的鉴定及分析.PCR及核苷酸序列测序结果显示,S19-Δbp26-ec构建成功.与亲本株相比,疫苗株S19-Δbp26-ec的生长特性没有显著性差异;体外连续传至20代后,茵落PCR和核苷酸测序结果显示,S19-Δbp26-ec株具有良好的遗传稳定性.被感染小鼠脾重和脾中茵落数表明,S19-Δbp26-ec的毒力最弱,S19和S19-Δbp26次之.上述结果表明,本试验获得了毒力减弱的基因突变株S19-Δbp26-ec,为牛布氏杆菌病-结核病二联疫苗的研制奠定了基础.

关键词：牛分枝杆菌、流产布氏杆菌、esat6-cfp10基因、基因突变株、毒力

所属期刊栏目：45

分类号：S852.614(动物医学（兽医学）)

资助基金：广东省教育部产学研结合项目;公益性行业农业科研专项

在线出版日期：2015-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：395-401