大熊猫白细胞介素-18的原核表达及免疫功能分析

摘要：

以本实验室构建的含有GpIL-18编码区序列的质粒pMD-GpIL-18为模板,PCR扩增GpIL-18ORF后连接到pET-28a原核表达载体,转化大肠杆菌Rosetta (DE3)进行诱导表达,纯化目的蛋白(PGpIL18).利用荧光定量PCR检测PGpIL-18蛋白对C57BL/6J小鼠脾细胞中细胞因子的影响.将PGpIL-18蛋白与细菌疫苗同时注射小鼠,检测其免疫增强效应.Western-blot结果表明,IPTG诱导PGpIL-18融合表达;其产物PGpIL-18能刺激小鼠脾细胞大量分泌IFN-γ,增加GM-CSF和TNF-α的表达量.同时注射PG-pIL-18蛋白和细菌疫苗的小鼠血清中IgG的质量浓度明显高于对照组.同时,通过金黄色葡萄球菌和大肠杆菌攻毒试验,发现PGpIL-18蛋白可以提高疫苗对小鼠的保护率.PGpIL-18能促进特异性免疫应答的发生,这一结果为重组PGpIL-18蛋白作为佐剂的开发利用奠定了理论基础.

关键词：大熊猫、白细胞介素-18、原核表达、免疫功能、小鼠

所属期刊栏目：44

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：成都大熊猫繁育研究基金CPF-2010-02

在线出版日期：2014-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1084-1088