猴源天然免疫限制性因子SAMHD1单克隆抗体的制备与鉴定
为制备具有广谱反应性的SAMHD1单克隆抗体,通过提取Marc-145细胞的总RNA,采用RT-PCR将SAMHD1全长编码基因定向克隆至pCold-TF原核表达载体中,成功构建了重组质粒pCold-mSAMHD1.重组质粒转化大肠杆菌Rosseta感受态细胞,经IPTG诱导表达并通过纯化获得了可溶性的重组SAMHD1蛋白.以纯化的重组SAMHD1蛋白为抗原,免疫8周龄BALB/c小鼠,通过间接ELISA和5次杂交瘤细胞亚克隆,筛选出1株针对SAMHD1蛋白的单克隆抗体,遂被命名为M2D9.Western-blot分析显示,M2D9能够与SAMHD1真核表达蛋白以及细胞内源性SAMHD1蛋白发生特异性反应,且具有很好的免疫沉淀效价.交叉反应性鉴定结果显示,M2D9抗体能够与人、鼠源细胞内SAMHD1蛋白发生特异反应.本研究成功获得了具有特异性和广谱反应性的猴源SAMHD1单克隆抗体,可用于ELISA检测、Western-blot分析和免疫沉淀试验,为SAMHD1蛋白功能的深入研究奠定了基础.
SAMHD1蛋白、单克隆抗体、广谱反应性
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S852.43(动物医学（兽医学）)
国家重点基础研究发展计划973项目2014CB542700;国家自然科学基金项目31100121,31302098;国家生猪现代产业技术体系建设项目NYCYTX-009;上海市重点基础研究项目11JC1415200
2014-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
921-926
