猪霍乱沙门菌缺失株△cyaC78-1和△crp△cyaC78-1的构建及其生物学特性比较
为开发更加安全有效且遗传背景清晰的减毒猪霍乱沙门菌活疫苗,运用自杀性质粒介导的等位交换技术缺失cya基因,分别构建猪霍乱沙门菌缺失株△cyaC78-1和△crp△cyaC78-1,并将两者的生物学特性与△crpC78-1和疫苗株C500进行比较.以猪霍乱沙门菌C78-1为模板,分别扩增cya基因的上臂和下臂,然后通过中间转移载体pBluescriptⅡSK(+)克隆至自杀性质粒pRE112中,构建重组自杀性质粒pRE△cya,再与C78-1和△crpC78-1分别进行接合转移,通过两步法筛选△cyaC78-1和△crp△cyaC78-1.PCR及测序结果表明,△cyaC78-1和△crp△cyaC78-1构建成功.生物学特性检测结果表明,所构建的△cyaC78-1和△crp△cyaC78-1的血清型和生化特性与△crpC78-1保持一致,并能够稳定遗传△cya基因;两者的生长速度明显慢于疫苗株C500,且△crp△cyaC78-1的生长速度最慢.小鼠毒力试验表明,△cyaC78-1的毒力高于△crpC78-1约1.7倍,较疫苗菌株C500下降至58.2％,但△crp△cyaC78-1的毒力较△crpC78-1下降至0.194％,较C500下降至0.065％.构建的猪霍乱沙门菌缺失株△cyaC78-1、△crp△cyaC78-1遗传稳定,背景清晰,毒力降低,尤其是△crp△cyaC78-1双缺失株的毒力较疫苗株C500降低显著,为筛选更加高效的减毒猪霍乱沙门菌疫苗和进一步开发适用于猪的口服活疫苗载体奠定了良好基础.
猪霍乱沙门菌、cyaC78-1、crp△cyaC78-1、重组自杀性质粒、毒力、生物学特性、减毒活疫苗
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S852.612(动物医学（兽医学）)
河南省科技攻关计划112102110019
2014-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
781-788
