口蹄疫病毒Asia 1/JSWX株基因组全长感染性克隆的体外拯救与序列分析

摘要：

通过反转录聚合酶链反应,获得了口蹄疫病毒(FMDV) Asia 1/J SWX株基因组3 ′端长片段(长约7.5 kb)和5′UTR中ploy(C)前后的2个短片段.5′UTR的2个短片段经融合PCR扩增得到长约710 bp的片段.用引物在基因组5 ′末端引入AflⅡ酶切位点和T7启动子,在5′UTR内引入Spe Ⅰ酶切鉴定位点,在3 ′末端引入NotⅠ酶切位点,将融合片段和3 ′端长片段顺次连接到载体pSL1180.经T7体外转录系统获取的RNA转录本与脂质体共转染BHK21细胞.测序结果表明,构建的病毒基因组全长cDNA为8 197 nt,分别包括1个长为1 095 nt的5′UTR”含有1个17 nt的ploy(C)”;1个长6 990 nt的ORF;1个长为93 nt的3′UTR;之后是18 nt的poly(A)尾巴.该全长cDNA克隆与Asia 1/Jiangsu/China/2005株基因组序列的同源性为98.4％.测序和酶切鉴定结果均表明,该口蹄疫病毒株全长cDNA克隆已构建成功,该方法极大地简化了获得FMDV全长cDNA克隆的过程.通过反转录聚合酶链反应、间接免疫荧光试验和蚀斑试验等鉴定,本试验获得了感染性分子克隆;体外拯救获得的基因工程病毒连续传代培养后,可致BHK21细胞产生病变.上述结果表明,构建的cDNA克隆可以作为基因操作的载体,为深入研究安全性好、稳定性高和免疫原性强的基因工程疫苗奠定了基础.

关键词：口蹄疫病毒Asia 1型、感染性全长cDNA、RNA体外转录本、序列分析、病毒拯救

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分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：”十二五”国家高技术研究发展计划项目2011AA10A211

在线出版日期：2014-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：771-780