比格犬α7干扰素成熟肽基因的原核表达及表达产物活性的分析

摘要：

从比格犬的脾中提取基因组DNA,采用RT-PCR方法扩增比格犬α7干扰素成熟肽基因.将纯化的PCR产物克隆至pMD19-T载体,转化入感受态细胞DH5α中,PCR检测及测序鉴定结果表明,克隆的目的基因为比格犬α7干扰素成熟肽,与GenBank中登录的犬干扰素序列(NM001006654)的同源性达到100％.在此基础上构建重组原核表达质粒pET-32a-CaIFN-α7,并转化至表达宿主BL21(DE3)中.该工程菌在37℃经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果在分子质量约38.4 ku处出现了目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在.经Bandscan软件分析,表达产物约占菌体总蛋白的48.5％.用Protein Re-folding Kit对包涵体进行纯化复性,重组CaIFN-α7在犬肾细胞(MDCK)上具有较高的抗病毒活性.

关键词：比格犬、α7干扰素成熟肽基因、克隆、原核表达、抗病毒活性

所属期刊栏目：44

分类号：S852.42(动物医学（兽医学）)

资助基金：“十二五”农村领域国家科技计划项目2012AA101303

在线出版日期：2014-04-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：298-302